アミノ酸配列分析
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アミノ酸の配列をひとつずつ丹念に分析していく手法です。アプロサイエンスは、国内で初めて従来の約100分の1の量でタンパク質の内部アミノ酸配列を短期間で正確に決定する技術の実用化に成功しました。この「超微量一次構造決定技術」により、微量にしか存在しないタンパク質の分析が可能になりました。 |
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■ N 末端アミノ酸配列分析 |
： 精製したタンパク質・ペプチドの溶液または電気泳動後にPVDF膜へ
転写したバンドをプロテインシークエンサーにて分析し、N末端アミノ
酸配列を決定します。 |
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■ Edman法による内部配列決定 |
： サンプルを電気泳動後に切り出した目的バンド(スポット)をプロテアー
ゼで処理し（ゲル内消化）、得られた断片ペプチドを逆相HPLCにて分
離して(ペプチドマップの作成)、ペプチドフラグメントのアミノ酸配列を
決定します。 |
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■ デブロッキング処理からの
N末端アミノ酸配列分析 |
： N末端アミノ酸がアセチル化もしくはピログルタミル化されたタンパク質を、
デブロッキング処理により 脱アセチル化 または 脱ピログルタミル化 し、
プロテインシークエンサーにて分析してN末端アミノ酸配列を決定します。
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質量分析（プロテオーム解析）
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アミノ酸の小さなまとまりであるペプチドを真空中に飛ばし、その質量から通常のタンパク質や病気等で生じたタンパク質などを解析する手法で、微量サンプルの高速分析が可能です。タンパク質の発現状況から細胞全体の働きを解析するのに適しています。アプロサイエンスでは最新鋭のペプチド質量分析装置を導入し、超微量解析システムを構築、2001年7月にプロテオーム解析の受託をスタートさせました。 |
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■ LC-MS/MS によるタンパク質同定 |
： 電気泳動後に切り出したバンド(スポット)をプロテアーゼで処理し
(ゲル内消化)、nano LC-MS/MS により断片ペプチドの精密MS/MS
解析を行い、データベースサーチによりタンパク質を同定します。 |
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■ MALDI-TOF MS による PMF分析 |
： 電気泳動後に切り出したバンド(スポット)をプロテアーゼで処理し(ゲ
ル内消化)、MALDI-TOF MS により断片ペプチドの精密質量を測定
し、データベースサーチによるタンパク質分析を行います
(PMF分析 : Peptide Mass Fingerprinting 分析)。 |
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■ タンパク質修飾部位解析 |
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■ 精密質量分析 |
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タンパク質・ペプチドの分離・精製
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■ 電気泳動 |
： アミノ酸配列分析や質量分析のために、サンプルから目的のタンパ
ク質を電気泳動により分離します。 |
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■ 逆相HPLCによるペプチド精製 |
： プロテアーゼ処理によりゲル内消化したペプチド断片を含むサンプルを
逆相 HPLC により分取し、ペプチドマッピングを作成します （Edman法に
よる内部配列決定などで実施していますが、ペプチドマッピング作成のみ
のご依頼からも受け付けております）。 |
網羅的発現タンパク質変動解析
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■ 二次元電気泳動比較解析 |
： ラージゲルを使用した二次元電気泳動を行い、泳動後のゲルを SYPRO
Ruby で染色後、2サンプル間の二次元電気泳動パターンの比較解析を実施いたします。 |
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糖鎖構造解析
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